血液基因组dna的提取 [血液中提取DNA的方法]

? 血液中提取DNA的方法与原理 实验步骤 原理 1.室温解冻血样,约10分钟。

解冻 2.取250ul血样,加1ml T10E10,上下翻动10分钟。

破碎红细胞 3.样品8000rpm,6分钟离心。

将白细胞和蛋白质沉淀 4.弃上清,沉淀用500ul T10E1冲洗后,8000rpm,6分钟离心。

离心将会分层蛋白质和白细胞,白细胞 沉淀在下层。

5.弃上清液,加300ul USSTE裂解悬浮,用力震荡。

破碎白细胞 6.用等体积的饱和酚抽提,混约2分钟,然后10000rpm,10分钟离心。

? 饱和酚将1. 有效变性蛋白质2.抑制DNAse的降解作用 但是缺点有:能溶解10-15%的水,从而溶解一部分poly(A)RNA.2.不能完全抑制RNAse的活性 ? 7.将上清液吸出(吸头尖端剪头一段,以免在吸取过程中损伤DNA)。用等体积的(吸出了多少加多少)氯仿异戊醇(24:1),混匀2分钟,直到看不到白色界面10000rpm,10分钟离心。

? 去除RNAse 氯仿的作用:客服酚的缺点;
加速有机相与液相分层 异戊醇的作用:减少蛋白质变性操作过程中产生的气泡。另外,有助于分相。

8.吸取上清,加入2倍体积冷无水乙醇,上下混匀,12000rpm,10分钟离心。

用冷无水乙醇是沉淀DNA的最佳方法 9.弃上清,加500ul的70%的乙醇浸洗2次,12000rpm,10分钟离心。

降低DNA的损失,提高收获率。

10.弃上清,自然放置30分钟。

空气中干燥DNA(晾干DNA上面的乙醇) 11.待乙醇晾干后加50ul T10E1 ,37℃溶解,贮存4℃或-20℃. ? 加快基因组DNA的溶解 ? ? ? 本文来自http://www.dxf5.com/